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離子對色譜由Gordon Schill博士于1973年建立，其方法是將離子性化合物添加到流動相中以促使離子與帶電荷分析物形成配對離子。這些試劑由帶有可離子化終端的烷基鏈組成。當在反相條件下用于常見的憎水性HPLC固定相時，離子對試劑可選擇性的增加帶電荷分析物的保留時間。

離子對試劑的選用步驟
1. 選擇一根適合的色譜柱，常為C18柱；
2.準備流動相時僅使用HPLC級別的水和色譜級試劑；
3.選擇能給出最佳分離度的流動相成分和濃度；
4.如果樣品中有非離子化物質，在嘗試離子化分離之前首先優(yōu)化分離情況；
5.選擇合適的離子對系列試劑以提供相應的離子配對：對于酸性分析物使用酸性離子對試劑；對于堿性分析物使用堿性離子對試劑；
用于酸性化合物：四丁基氫氧化銨（10%水溶液） 、四丁基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨
用于堿性化合物：戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉 、庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、癸烷磺酸鈉
6.通過比較選擇所得分離度最好的離子對試劑；
7.一旦離子對試劑已經(jīng)確定，調節(jié)流動相的pH值將分離度最大化；因為微小的pH值改變對保留性質和選擇性都有較大的影響，所以仔細小心的小幅度調節(jié)pH值；
8.理想狀況下，流動相中的離子對試劑濃度應為0.005M，但是稍微增加離子對試劑可能會稍微增加保留性質并因此優(yōu)化分離情況。

離子對色譜法中的變量影響

離子對色譜法相比于普通反相色譜法，可以通過調節(jié)參數(shù)（包括pH、離子對試劑的類型和濃度、溫度等）來滿足分離度等要求。

1. 流動相的pH：在離子對方法中pH不僅影響分析物的離子化程度，也影響加入的離子對試劑的離子化進度而影響與分析物的離子對作用，因此pH的改變對分析物保留的影響更加復雜。

2. 溫度：離子對方法中溫度的改變會引起相對保留值發(fā)生顯著性的變化。溫度會改變色譜柱上吸附的離子對試劑的量，因此控制溫度對分離特別重要。

3. 離子對試劑的類型和濃度：大多數(shù)情況下，固定相中離子對試劑的濃度會影響溶質的離子交換的保留行為，而離子對試劑的類型和濃度會直接影響其在固定相中的濃度。

*當想要獲得一定的保留時，可以使用更低濃度的，疏水性更強的離子對試劑或者更高濃度的，疏水性更弱的離子對試劑。

*當固定相中的離子對試劑達到飽和時，繼續(xù)增加離子對試劑的濃度反而會降低分析物的保留，因為離子對試劑的反離子濃度增加，加大與分析物的離子交換競爭。

*流動相的pH和離子對試劑的濃度的同時改變，則可以在很大程度上控制離子樣品的保留范圍和相對保留值。

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